ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОТ-ПЦР РВ ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА
DOI:
https://doi.org/10.52578/2305-9397-2025-3-1-162-171%20Ключевые слова:
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОТ-ПЦР РВ ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВААннотация
Бешенство - важнейшая проблема как здравоохранения, так и ветеринарии. По оценке ВОЗ бешенство занимает одно из ведущих мест среди инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший экономический ущерб.
Разработка отечественной тест-системы для диагностики бешенства представляет собой важную задачу, обусловленную потребностью в раннем выявлении заболевания. Определение чувствительности и специфичности, подбор оптимальной концентраций каждого компонента в реакционной смеси является важным параметром при разработке ОТ ПЦР РВ тест-системы. Оптимизация температуры плавления отжига пары праймеров N-RabF и N-RabR составила 55°С, концентрация ионов магния MgCl2 2,5 мМ, концентрация зонда 150-250 нМ, оптимальная концентрация фермента Enzyme mix нарабатывается от 0,25 ед. и выше, рабочая концентрация олигонуклeотидных прaймeров N-Rab F и N-Rab R составляет 20 пмоль.
Целью исследования является повышение эффективности лабораторной диагностики бешенства, в связи с чем был разработан набор реагентов для обнаружения РНК вируса бешенства с использованием метода обратной транскриптазной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Были оптимизированы такие параметры реакционной смеси, как концентрации и соотношение праймеров, ионов Mg2+, Enzyme mix и зонда.
Библиографические ссылки
Padilo L. P.; Agoltsov V. A.; Gusev A. A.; et al. Epidemiology of rabies infection under conditions of regions of the world epizootiologically unfavourable for rabies // Uchenye zapiski Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine. – 2024. – Vol. 60, № 1. – С. 32-36. – DOI: 10.52368/2078-0109-2024-60-1-32-36.
Greenlee J. E. Rabies // MSD Manual – Professional Version [Электрон. ресурс]. – Merck & Co., 2022. – URL: https://www.msdmanuals.com/professional/neurologic-disorders/brain-infections/rabies
Nishizono A. [Rabies] // Brain Nerve. – 2009. – Vol. 61, № 2. – С. 135-144. – PMID: 19235463.
Интернет ресурс – URL: https://www.gov.kz/memleket/entities/pavlodar-bayanaul/press /news /details /855238?lang=ru
Макаров В. В. Бешенство: проблемы новые и старые // Ветеринарный консультант. – 2003. – № 7. – С. 4-8.
Hemachudha T.; Wacharapluesadee S.; Laothamatas J.; Wilde H. Rabies // Current Neurology & Neuroscience Reports. – 2006. – Vol. 6, № 6. – С. 460-468. – DOI: 10.1007/s11910-006-0047-2. – PMID: 17074280.
Marston D. A.; Jennings D. L.; MacLaren N. C.; et al. Pan-lyssavirus real-time RT-PCR for rabies diagnosis // Journal of Visualized Experiments. – 2019. – № 149. – 10 с. – DOI: 10.3791/59709. – PMID: 31355796.
Дедков В. Г.; Девяткин А. А.; Полещук Е. М.; Сафонова М. В.; Маркелов М. Л.; Шипулин Г. А. Разработка и апробация набора реагентов для определения РНК классического вируса бешенства методом ОТ-ПЦР в реальном времени // Вопросы вирусологии. – 2016. –
Т. 61, № 5. – С. 235-240. – DOI: 10.18821/0507-4088-2016-61-4-235-240.
Айкимбаев А. М.; Тулеуов А. М.; Жолшоринов А. Ж.; Бекенов Ж. Е. Мониторинг очагов рабической инфекции в Казахстане // Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане. – Алматы: ННЦООИ, 2016. – Вып. 1. – 160 с.
Аппель Б.; Бенеке Б.-И.; Бененсон Я.; и др. Нуклеиновые кислоты: от А до Я / пер. с англ.; под ред. С. Мюллера. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2013. – 413 с. – ISBN 978-5-9963-0376-2.
Абрамова Е.Г., Никифоров А.К., Мовсесянц А.А., Жулидов И.М. Бешенство и антирабические иммунобиологические препараты: от прививки Пастера к современным биотехнологиям // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2019. - Т. 96. - №5. - C. 83-94. doi: 10.36233/0372-9311-2019-5-83-94
Макаров В. В. Бешенство // Российский ветеринарный журнал. – 2017. – № 1. –
С. 28-34.
Mani R. S.; Madhusudana S. N. Laboratory diagnosis of human rabies: recent advances // Scientific World Journal. – 2013. – Article ID 569712. – DOI: 10.1155/2013/569712. – PMID: 24348170.
World Health Organization (WHO). The immunological basis for immunization series. Module 17: Rabies. Update 2017. – Geneva: WHO, 2017. – 49 p. – ISBN 978-92-4-151337-1.
Ryabov E.V. Invertebrate RNA virus diversity from a taxonomic point of view. J Invertebr Pathol. 2017 Jul;147:37-50. doi: 10.1016/j.jip.2016.10.002. Epub 2016 Oct 25. PMID: 27793741; PMCID: PMC7094257.
Никифоров В. В.; Авдеева М. Г. Бешенство. Актуальные вопросы // Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2017. – Т. 22, № 6. – С. 295-305. – DOI: 10.18821/1560-9529-2017-22-6-295-305.
Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Rabies pre-exposure vaccination [Электрон. ресурс]. – 2024. – URL: https://www.cdc.gov/rabies/hcp/prevention-recommendations /pre-exposure-prophylaxis.html
Lembo T.; Niezgoda M.; Velasco-Villa A.; et al. Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis // Emerging Infectious Diseases. – 2006. – Vol. 12,
№ 2. – С. 310-313. – DOI: 10.3201/eid1202.050812. – PMID: 16494761.
Lourenç Correia Moreira B.; Pereira L. A.; Lappas Gimenez A. P.; Minor Fernandes Inagaki J.; Raboni S. M. Development and validation of a real-time RT-PCR assay for the quantification of rabies virus as quality control of inactivated rabies vaccines // Journal of Virological Methods. – 2019. – Vol. 270. – С. 46-51. – DOI: 10.1016/j.jviromet.2019.04.025. – PMID: 31047970.
Coleman P. G.; Fèvre E. M.; Cleaveland S. Estimating the public health impact of rabies // Emerging Infectious Diseases. – 2004. – Vol. 10, № 1. – С. 140-142. – DOI: 10.3201/eid1001.020774. – PMID: 15078611.
