Получение человеческой антивидовой сыворотки для серологической диагностики поствакцинального иммунитета против оспы обезьян
DOI:
https://doi.org/10.52578/2305-9397-2025-3-1-397-408%20Ключевые слова:
оспа обезьян, человеческая антивидовая сыворотка, иммунизация, кролики, козыАннотация
Несмотря на глобальную ликвидацию оспы в 1977 году, вирус продолжает представлять серьезную угрозу в контексте биобезопасности из-за своего потенциала в качестве биологического оружия. Вирус оспы легко культивируется, может быть высушен методом лиофилизации и сохраняет стабильность при защите от воздействия высоких температур и ультрафиолетового излучения. В связи с этим подчеркивается необходимость постоянной эпидемиологической настороженности, а также продолжения разработки современных вакцин и диагностических средств.
В данной работе предпринята попытка получения человеческой антивидовой сыворотки, пригодной для разработки иммуноферментного анализа (ИФА), предназначенного для оценки эффективности вакцин против оспы.
В качестве антигена использовался человеческий γ-глобулин, выделенный спиртовым методом Кона при конечной концентрации 12,54 мг/мл. Для получения антивидовой сыворотки в качестве лабораторных животных были использованы козы местных пород и кролики массой 2–2,5 кг. Схемы иммунизации различались между собой по дозам вводимого антигена, интервалам между инъекциями и локализации введения.
В результате экспериментальной работы установлено, что наибольшую специфическую активность продемонстрировала сыворотка, полученная от кролика по схеме №1 (титр в реакции диффузионной преципитации — 1:64). Эта сыворотка будет использоваться в качестве основного диагностического реагента для отработки условий постановки ИФА, направленного на выявление антител к вирусу оспы обезьян (Monkeypox).
Разработка высокоспецифичных и чувствительных методов диагностики, таких как ИФА, основанных на антивидовых сыворотках, имеет важное значение для эпидемиологического надзора, особенно в условиях риска повторного появления или искусственного распространения вируса.
Библиографические ссылки
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Sklenovská, N. Emergence of monkeypox as the most important orthopoxvirus infection in humans /N. Sklenovská, M. Van Ranst // Frontiers in Public Health. – 2018. – Vol. 6. – P. 241. – DOI: 10.3389/fpubh.2018.00241.
Bunge, E. M. The changing epidemiology of human monkeypox – a potential threat?
A systematic review / E. M. Bunge, B. Hoet, L. Chen [et al.] // PLoS Neglected Tropical Diseases. – 2022. – Vol. 16, № 2. – e0010141. – DOI: 10.1371/journal.pntd.0010141.
Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Monkeypox: History of Outbreaks [Electronic resource]. – 2023. – Available at: https://www.cdc.gov/poxvirus/monkeypox /outbreak.html (accessed: 09.09.2025).
Reynolds, M. G. The detection of monkeypox in humans in the Western Hemisphere /
M. G. Reynolds, I. K. Damon [et al.] // New England Journal of Medicine. – 2022. – Vol. 386, № 10. – P. 857–866. – DOI: 10.1056/NEJMra2202023.
Reynolds, M. G. Ecology and transmission of monkeypox virus in Africa / M. G. Reynolds, M. H. Davidson, I. K. Damon // The Journal of Infectious Diseases. – 2019. – Vol. 223, Suppl 2. –
P. S87–S95. – DOI: 10.1093/infdis/jiz396.
Meseko C. Which animals carry mpox? Our study identified African forest dwelling rodents as one source / C. Meseko // The Conversation. – 2024. – 14 Nov. – URL: https://www.gavi.org/vaccineswork/which-animals-carry-mpox-our-study-identified-african-forest-dwelling-rodents-one.
Alakunle E., Okeke M. I. The resurgence of monkeypox virus: a critical global health challenge and the need for vigilant intervention // Front. Public Health. – 2025. – Vol. 13. – DOI: 10.3389/fpubh.2025.1572100.
Kaler J., Hussain A., Flores G. et al. Monkeypox virus: the changing facets of a zoonotic pathogen // Annals of Medicine and Surgery. – 2022. – Vol. 74. – P. 103149. – DOI: 10.1016/j.amsu.2022.103149.
Qiu J. Scientists may have finally found the mysterious animal hosts of mpox / J. Qiu // Scientific American. – 2025. – 9 Apr. – URL: https://www.scientificamerican.com/article/mpox-outbreak-in-africa-traced-back-to-squirrels.
Besombes C., Gonofio E., Selekon B. et al. Seasonal patterns of mpox index cases, Africa, 1970–2021 // Emerg. Infect. Dis. – 2024. – Vol. 30, № 5. – P. 895–903. – DOI: 10.3201/eid3005.230293.
Центры по контролю и профилактике заболеваний. Карта вспышек оспы обезьян в мире в 2022 году [Text] — URL: https://www.cdc.gov/poxvirus/monkeypox/response/ 2022/world-map.html (дата обращения: 6 ноября 2022 г.).
Shchelkunov S. N. Orthopoxvirus genes that mediate disease virulence and host tropism // Adv. Virus Res. – 2021. – Vol. 109. – P. 97–135. – DOI: 10.1016/bs.aivir.2021.01.002
Kugelman J. R., Johnston S. C., Hensley L. E., Davidson W. B. Monkeypox virus evolution and its implications for the 2022 global outbreak // Nat. Microbiol. – 2023. – Vol. 8. – P. 1035–1044. – DOI: 10.1038/s41564-023-01343-1.
Likos A. M., Sammons S. A., Olson V. A. et al. A tale of two clades: monkeypox viruses // J. Gen. Virol. – 2022. – Vol. 103, № 3. – DOI: 10.1099/jgv.0.001797.
Shchelkunov S. N., Totmenin A. V., Babkin I. V. et al. Human monkeypox and smallpox viruses: genomic comparison and phylogenetic analysis // FEBS Lett. – 2020. – Vol. 586. – P. 1928–1932. – DOI: 10.1016/j.febslet.2020.03.025.
Miura F., et al. Transmission routes of monkeypox virus in the 2022 outbreak: a systematic review // Lancet Infectious Diseases. – 2023. – Vol. 23, № 3. – P. 304–312. – DOI: 10.1016/S1473-3099(22)00762-9.
Karan A., et al. Human-to-human transmission of monkeypox virus among men who have sex with men in the United Kingdom, 2022 // New England Journal of Medicine. – 2022. – Vol. 387, № 6. – P. 576–584. – DOI: 10.1056/NEJMoa2207323
Antinori A., et al. Epidemiological, clinical and virological characteristics of four cases of monkeypox support transmission through sexual contact, Italy, May 2022 // Euro Surveillance. – 2022. – Vol. 27, № 22. – P. 2200421. – DOI: 10.2807/1560-7917.ES.2022.27.22.2200421
Grosenbach, D.W. Oral tecovirimat for the treatment of smallpox [Text] / D.W. Grosenbach, K. Honeychurch, E.A. Rose // N. Engl. J. Med. 2018;379(1):44–53. DOI: https://doi.org/10.1056 /nejmoa1705688.
Rodriguez-Diaz, J., et al. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies in viral infections: principles and applications // Clin. Microbiol. Rev. – 2021. – Vol. 34,
№ 1. – P. e00145-20. – DOI: 10.1128/CMR.00145-20.
Ушкаленко, Н.Д. Ускоренный метод иммуноферментного анализа для выявления ортопоксвирусов [Text] / Н.Д. Ушкаленко, А.В. Ерш, П.В. Филатов, А.Г. Полтавченко // Вопросы вирусологии. 2023;68(3):242-251. (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0507-4088-178.
Петров, A. A., Смирнова Н.В. Иммуноферментный анализ (ИФА) в диагностике вирусных инфекций // Вестник вирусологии. – 2022. – Т. 67, № 3. – С. 45–53.
Kozlov, I. A., et al. Laboratory methods for the evaluation of vaccine-induced immunity: ELISA and neutralization assays // Vaccine Research. – 2023. – Vol. 8, № 2. – P. 89–97. – DOI: 10.1016/j.vacres.2023.02.005.
Иванов В.В., Павлова, M. С. Методы иммунодиагностики вирусных заболеваний человека // Медицинская иммунология. – 2020. – Т. 15, № 4. – С. 210–218.
Smith J., et al. Optimization of ethanol fractionation for human immunoglobulin purification // Journal of Immunological Methods. – 2021. – Vol. 488. – P. 112939. – DOI: 10.1016/j.jim. 2021.112939.
Евдокимов, А. А., Соколова, Т. В. Методы выделения иммуноглобулинов из сыворотки крови человека // Журнал иммунологии – 2019. – Т. 45, № 2. – С. 102–110.
Ivanova A., Petrov S. Modern techniques for isolation of immunoglobulins from human serum: a review // Biomedical Chemistry. – 2020. – Vol. 66, № 4. – P. 345–356. – DOI: 10.1007/s11010-020-03732-1
Kuznetsova L., et al. Advances in immunoglobulin purification methods for diagnostic applications // Journal of Clinical Laboratory Analysis. – 2019. – Vol. 33, № 7. – e22945. – DOI: 10.1002/jcla.22945.
Petrova N., Makarov E. Application of alcohol fractionation in immunoglobulin isolation: review and practical aspects // Biotechnology Reports. – 2023. – Vol. 37. – P. e00678. – DOI: 10.1016/j.btre.2023.e00678.
Zhang Y., et al. Comparative evaluation of adjuvants for enhancing humoral immune response in experimental vaccines // Vaccine. – 2021. – Vol. 39, № 5. – P. 695–702. – DOI: 10.1016/j.vaccine.2020.11.038.
Ivanov A. V., Sidorova E. N. The use of immunoadjuvants in veterinary vaccine development: properties and mechanisms // Veterinary Immunology and Immunopathology. – 2020. – Vol. 224. – P. 110058. – DOI: 10.1016/j.vetimm.2020.110058.
Petrova N. A., Makarov E. V. Application of double immunodiffusion (Ouchterlony) and ELISA for antibody titer evaluation in immunized animals // Journal of Immunological Methods. – 2022. – Vol. 501. – P. 113214. – DOI: 10.1016/j.jim.2021.113214.
Тимашева О.А., Басалгина С.А. Способ получения флуоресцирующего антивидового коньюгата против IG G человека или животного для реакции непрямой иммунофлуоресценции [Text] / О.А. Тимашева, С.А. Басалгина // Патент. Опубликовано: 27.11.2004. Федеральная служба по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам. Российской Федерации.
Kuznetsova L. S., et al. Characteristics of anti-immunoglobulin sera produced in rabbits and goats for immunodiagnostic applications // Biotechnology Reports. – 2019. – Vol. 23. – e00342. – DOI: 10.1016/j.btre.2019.e00342.
